试验方法丨医疗器械生物学评价——口腔黏膜刺激
口腔黏膜柔软湿润，易受损伤，暂时或长期与口腔黏膜组织接触的口腔护理产品、口腔医疗器械等均需对口腔黏膜产生的刺激作用进行评估。口腔黏膜刺激性检测试验是在体外模拟口腔护理类产品、口腔医疗器械对黏膜的作用，通过检测组织活力确定此类产品对口腔黏膜产生的刺激性有无及强弱。
口腔刺激试验应仅考虑用于预期与口腔组织接触的材料（如 牙膏、漱口水、口腔护理液、义齿等产品）,并且只有在用其他方法不能得到安全性数据的情况下才考虑进行。
试验依据
GB/T 16886.10-2017《医疗器械生物学评价 第 10部分：刺激与皮肤致敏试验》
ISO 10993-10 医疗器械的生物学评价 第10部分：皮肤致敏试验
一般采用以上两种标准中推荐的方法对样品原液/样品浸提液引起口腔黏膜刺激反应的潜在性进行评价。
应排除的试验材料
（1）任何已显示为皮肤或眼的刺激物；
（2）pH≤2.0或 ≥11.5的材料不应再进行试验。
以上两种材料可标示为潜在的口腔组织刺激物。
需要进一步的风险表征/评定的例外情况下，即使已知被试材料是刺激物或材料的pH在上述范围之外可能还是需要进行测试，这种情况应论证并形成文件。
试验材料
在进行试验以及解释刺激/致敏试验数据时,应考虑医疗器械在人体应用时的接触性质、程度、频率、时间和条件等因素,对这些试验最关键的因素之一就是试验材料的制备 。
浸提条件建立在通常可行并经论证为一个标准化方法的基础之上,在多数情况下为产品使用 的适当加严的条件。应在下列之一的条件下进行浸提：
a) (37±1) ℃ (72±2)h;
b) (50±2) ℃ (72±2)h;
c) (70±2) ℃ (24±2)h;
d) (121±2) ℃ (1±0. 1)h。
标准表面积和浸提液体积
注:由于制造过程原因,许多弹性体表面特性可能与一般块状材料的表面特性有所不同。
浸提时应使用极性和非极性两种溶剂。浸提介质示例:
a) 极性浸提介质:水、生理盐水;
b) 非极性浸提介质:符合各国药典质量规定的新鲜精制植物油(如棉籽油或芝麻油);
c) 其他浸提介质:乙醇/水、乙醇/生理盐水、聚乙二醇400(稀释至生理渗透压)、二甲基亚砜。
动物与管理
应使用健康、初成年的金黄色地鼠, 同一品系,雌雄不限。应使动物适应环境,并按 ISO10993-2的规定饲养。
除此以外 ,适当时给动物套上1个3mm~4mm宽的适用项圈,使动物能维持正常进食和呼吸,且又能防止动物口腔内棉球移出。试验期间动物每天称重,连续7d。在此期间,检查每只动物的体重下降情况,必要时调整项圈。如动物体重持续下降,将其从试验中淘汰。
初试应至少使用3只动物评价试验材料。
注 : 另取动物用相应的阴性对照材料或空白液进行试验可能适用。
初试反应如疑似或不明确 ,应考虑进行复试。
试验步骤
实验样品制备
将动物称重后，用龙胆紫进行标记
除掉动物项圈,翻转颊囊用生理盐水冲洗后,检查有无异常。
对于固体试验材料,可直接将样品(直径不大于5mm)放入颊囊内。
对液体试验材料或浸提液样品,则可用棉球浸透样品,记录吸收的体积,放入动物的一侧颊囊内。也可将适宜体积的样品直接灌注入颊囊。
另一侧颊囊不放样品作为对照。应使用适宜的对照动物进行平行试验。
必要时重新给动物带上项圈放回笼中。
接触时间应与材料预期实际使用时间一致,但不能少于5min。
接触后除去项圈和棉球,用生理盐水冲洗颊囊,注意不要污染另一侧颊囊。
对于急性接触,每小时(±0.1h)重复上述步骤,共4h。
重复接触试验时,应根据预期临床应用情况确定试验用量、接触次数、时间和间隔期。
动物观察
取出棉球后肉眼观察颊囊,并且在每次接触前(如需重复接触时)检查颊囊。
描述动物颊囊的一般状况,并按表B.2给出的记分系统判定动物每一观察期颊囊表面红斑反应记分。记录结果以出具试验报告。
末次接触后(24±2)h肉眼观察颊囊,无痛处死地鼠。取颊囊有代表性部位的组织样品,放入适宜的固定液中固定后进行组织学检查。
结果评定
肉眼观察评价
比较试验侧颊囊与对侧颊囊,如有对照组,则还应与对照组动物的颊囊进行比较。每一 观察记分(见表B.2)相加后再除以观察总数得出每只动物平均记分。
注 1: 这些观察可能有助于组织学评价。
注 2: 试验材料首次接触前的初始观察结果不包括在平均记分中。
组织学评价
氯化钠浸提组
棉籽油浸提组
应由病理学家对口腔组织显微镜下的刺激作用进行评价,可按《口腔、阴茎、直肠和阴道组织反应显微镜检查计分系统》给出的记分系统对每一组织进行评分。
试验组中所有动物的显微镜评价记分相加,再除以观察总数,得出试验组平均记分。对照组同法计算。最大记分为16。
口腔、阴茎、直肠和阴道组织反应显微镜检查记分系统
对照颊囊或对照动物的显微镜评价总分大于9时可能表明有病理改变,可能是试验操作时造成的损伤。如其他试验或对照动物出现同样的高分,无论是哪种情况,可能都有必要进行复试。
试验组平均记分减去对照组平均记分得出刺激指数。
刺激指数表
对于重复接触试验,可将《口腔、阴茎、直肠和阴道组织反应显微镜检查计分系统》修改为适合于对有关慢性刺激组织反应的评价。
试验报告
试验报告应包括:
a) 试验样品的描述;
b) 试验样品的预期用途/应用;
c) 制备试验样品所用方法的详细描述;
d) 试验动物的描述;
e) 接触方法;
f) 试验部位记分;
g) 观察记录;
h) 组织学评价;
i) 结果评定。
